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File name:螯虾血细胞培养
Category:Protocols
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Published:2013-11-27 03:52:29
Update:2013-11-27 03:53:01
Summary:

一、试剂

1、抗凝剂(pH 5.0)

      柠檬酸钠 26 mmol/L;柠檬酸 30 mmol/L;葡萄糖 0.1 mol/L;NaCl 0.14 mol/L;EDTA 10 mmol/L

2、培养基(pH 7.0)

      L-15培养基中添加15%胎牛血清,青霉素(50 U/ml),链霉素(50 U/ml)

二、实验步骤

1、抽取血淋巴之前,将螯虾在清水中洗净,虾体用酒精棉球擦拭3 次,消毒体表;

2、取2 mL 注射器中预先抽取1 mL 的螯虾抗凝剂。从心脏处采集血淋巴,体积不超过1 ml;

3、将采集的血淋巴在常温条件下,300×g 离心5 分钟,弃上清,细胞沉淀用适量的培养基重悬均匀,

      接种到细胞培养皿中,使细胞贴壁后能覆盖>90%的培养皿底面积;

4、27 ℃孵育1 h,待细胞贴壁后更换新的培养基。

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