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File name:昆虫细胞Highfive的复苏、培养及冻存
Category:Protocols
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Published:2013-11-27 04:12:12
Update:2013-11-27 04:13:42
Summary:

一、试剂

1、培养基

    SFX培养基中添加5%胎牛血清,青霉素(50 U/ml),链霉素(50 U/ml)
  
二、实验步骤

1、将细胞冻存管从液氮罐中取出,快速放于37℃水浴中融化细胞;
 
2、取1 ml 细胞冻存液转移到培养瓶中,加入4 ml 新鲜培养基,放入27℃培养箱培养;

3、细胞贴壁30-45 min后更换新鲜培养基,24 h 后再次更换培养基继续培养;

4、显微镜观察培养瓶中细胞的生长状况,待细胞数达约80%-90%,对培养基进行换液传代;

5、吸去培养瓶中的培养基,加入5 ml PBS洗涤细胞,弃除PBS;

6、再加入5 ml 新鲜培养基,用移液枪轻轻吹打悬浮细胞;

7、吸取1/5的悬浮液,转移至新的培养瓶中,补加培养基至5 ml,27℃培养箱培养;

8、细胞生长状态良好时,收集生长良好的细胞于15 ml 离心管中,1000 rpm 离心10 min,弃上清;

9、加入含有10% DMSO和15%胎牛血清的新鲜培养基,吹散细胞团;

10、按3-5×106/ml量分装,1ml/冻存管,放入冻存盒;

11、将冻存盒放于-80℃冰箱过夜,次日移至液氮中,做好记录。

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