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File name:昆虫细胞Highfive的质粒转染
Category:Protocols
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Published:2013-11-27 04:19:02
Update:2013-11-27 04:19:02
Summary:

一、试剂

1、培养基 

      SFX培养基中添加5%胎牛血清,青霉素(50 U/ml),链霉素(50 U/ml)

2、转染试剂

      CellfectinII (Invitrogen)

二、实验步骤

1、按106 细胞/孔,接种至6 孔细胞培养板(可根据需要选择培养板大小),27℃培养过夜;

2、将1 μg质粒与200 μl 不添加胎牛血清的 SFX 培养基混匀制备A液;

3、将4 μl CellfectinII 转染试剂与200 μl 不添加胎牛血清的SFX培养基混匀制备B液;

4、将A、B 两种液体混合制备C液,置27℃培养箱中预热30 min;

5、去除细胞中的培养基,并用新鲜的培养基漂洗一次;

6、在C液中加入400 μl培养基,混匀,然后加入到细胞培养板中,27℃培养5 h;

7、更换新鲜培养基,继续培养60 h;

8、收集转染细胞,检测蛋白表达情况。

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