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File name:大肠杆菌化学感受态细胞的制备
Category:Protocols
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Published:2013-10-09 09:50:37
Update:2013-11-14 03:52:40
Summary:

一、试剂

1、LB培养基

    NaCl 1%;Yeast Extract 0.5%;Tryptone 1%;琼脂 1.5% (固体培养基)

2、0.1M MgSO4:高压灭菌

3、0.1M CaCl2:高压灭菌

4、75% 甘油:高压灭菌

二、实验步骤

1、挑取E. coli DH5α单菌落至100 mL LB液体培养基中,37℃ 200 rpm/min 摇动培养;

2、培养5—6 hr,测定OD600 nm,读数介于0.2—0.3;

3、转移菌液至250 mL离心瓶,4℃下4000 rpm/min 离心5 min,弃上清;

4、加入30 mL冰预冷的0.1M MgSO4,重悬菌体,冰浴15 min;

5、4℃下4000 rpm/min 离心5 min,弃上清;

6、加入10 mL冰预冷的0.1M CaCl2,重悬菌体;

7、加入甘油至终浓度15%,重悬混匀;

8、分装成每管200 μL,-70℃超低温保藏。

 

 

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